문정왕후는 1562년 중수 불사를 마친 회암사의 낙성식에 맞춰 명종(明宗)의 병세 회복과 세자 탄생을 기원하며 석가모니불·미륵불·아미타불·약사불의 화상(畵像)을 각각 금화(金畵)로 50점, 채화(彩畵)로 50점씩 제작하도록 하였다. 이 불화는 문정왕후의 발원으로 조성된 400점 불화중의 하나이다. 주존의 무릎위에 놓였던 약함은 소실되었으나 대좌 앞에 시립한 일광보살과 월광보살로 볼 때 약사삼존도로 조성되었음을 알 수 있다. 안면과 육신부, 머리카락만 채색하고 모두 금니 선묘로 그린 금화(金畵)로, 조선 중기 왕실발원 불화의 우수한 수준을 보여준다.